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免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

[2015/12/1]

  1.酶免疫測(cè)定(enzyme immunoassay可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進(jìn)行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離而直接測(cè)定標(biāo)記物。例如在某種條件下,抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物中的酶失去其對(duì)底物作用的活力,因而測(cè)出的酶活力直接反映游離的酶標(biāo)記物。均相EIA在臨床檢驗(yàn)中較少應(yīng)用。非均相EIA需先進(jìn)行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離。如前所述,固相載體可用作一種分離手段。

  2.免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣,在臨床檢驗(yàn)中可用于測(cè)定:
  1)體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
  2)激素,包括小分子量的甾體激素等。
  3)抗生素和藥物。
  4)病原體抗原,HBsAg、HBeAg等。
  5)另外,也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等。

  3.標(biāo)記的免疫測(cè)定如上所述,免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定方法,抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度,敏感度可達(dá)5~10μg/ml,但在臨床檢驗(yàn)中,某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記,通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物來(lái)提高敏感度。在放射免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定中,標(biāo)記物分別為放射性核素和酶,最后用測(cè)定放射性和酶活力來(lái)計(jì)算待檢物的量,敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中,一般加入過(guò)量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物徹底反應(yīng)。以標(biāo)記抗體(Ab※)檢測(cè)抗原(Ag)為例,反應(yīng)式如下:Ag+Ab※→AgAb+Ab
  在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※,如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物,測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此,游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟?刹捎枚喾N手段,固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上,然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng),結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載體上,而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過(guò)洗滌將游離的Ab※除去,結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。


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