隨著近代光學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及微電子、計(jì)算機(jī)技術(shù)的融合，賦予光學(xué)顯微鏡以新的生命力。在掌握必要的顯微鏡及其各種鏡檢法的理論知識基礎(chǔ)上，精確進(jìn)行調(diào)試、校準(zhǔn)和定期維護(hù)，對于保證顯微鏡技術(shù)的有效利用和觀測質(zhì)量尤為重要。對于鏡檢法操作過程中常易疏漏的調(diào)制環(huán)節(jié)我們來作為重點(diǎn)討論一下。

　　1 明場(bright field, BF)

　　定期進(jìn)行聚光鏡中心調(diào)整，實(shí)時進(jìn)行聚光鏡與物鏡NA的對應(yīng)數(shù)值調(diào)設(shè)。清潔蓋玻片、載玻片，確保沒有手印、沾染物。使用油鏡時，調(diào)焦或移動視野要慢些以維持浸油形成的表面張力保證對焦和孔鏡角穩(wěn)定，兼做熒光觀察的物鏡最好統(tǒng)一用無熒光油。

　　2 暗場(dark field, DF)

　　暗場鏡檢首先是利用暗場聚光鏡的環(huán)狀裂隙和凹面鏡制造有序的斜射光，因此必須調(diào)整好光軸對中。要清潔物鏡的前透鏡等光學(xué)器件和標(biāo)本片，載玻片不能太厚，否則聚光鏡的焦點(diǎn)落到被檢物體焦面以外。

　　3 相差(phase contrast, PH)

　　鏡檢前，要用調(diào)中鏡(centering telescope，CT)逐一檢查物鏡的相板與所對應(yīng)的聚光鏡相差環(huán)是否達(dá)到光學(xué)共軛，即聚光鏡相差環(huán)環(huán)狀光闌像的透明圈與物鏡相板共軛面完全吻合，才能達(dá)到理想的相差效果。一般情況下，聚光鏡的孔徑光闌應(yīng)適當(dāng)開大或設(shè)置在標(biāo)定PH位。切片控制在5～10μm厚度，封片劑要均勻。

　　4 DIC相差(differential interference contrast, DIC)

　　標(biāo)本或器皿要潔凈無塵，必須事先調(diào)整好起偏鏡、檢偏鏡和DIC棱鏡的設(shè)置，用CT鏡檢測出現(xiàn)清晰的干涉條紋。但兼做熒光觀察時，要把DIC器件移出光路，以避免較強(qiáng)的激發(fā)光損傷DIC器件的光學(xué)鍍膜。塑料器皿最好選擇Hoffman調(diào)制相差(Hoffman modulationcontrast，HMC)。

　　5 熒光(fluorescence，F(xiàn)L)

　　需遵循說明書熟練掌握熒光光源的燈絲對中方法，當(dāng)熒光照明不均或亮度不佳時進(jìn)行檢查調(diào)整，特別是在移動了熒光顯微鏡位置、過度振動、誤觸碰了聚光和對中調(diào)節(jié)螺桿等情形后。在研究室熒光裝置最好在視場光闌的基礎(chǔ)上加配置孔徑光闌調(diào)節(jié)，并定期檢查熒光激發(fā)光路中心，根據(jù)標(biāo)本情況調(diào)節(jié)孔徑光闌和光路聚焦。汞燈在開啟約5分鐘后達(dá)到最佳弧光照明亮度，一旦關(guān)閉必須等15～20分鐘后方可再次開啟(待汞蒸汽復(fù)至常態(tài))。