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免疫染色的前期樣品準(zhǔn)備

[2015/8/15]

  對于貼壁細(xì)胞:可以直接用多孔板,例如6孔板、24孔板等,培養(yǎng)細(xì)胞,然后到預(yù)定時間時進(jìn)行固定等后續(xù)操作。也可以用潔凈的蓋玻片,70%乙醇中浸泡后,用無菌的鑷子放置到6孔板內(nèi),然后用無菌的生理鹽水、PBS或培養(yǎng)液洗去殘留的乙醇。這時就可以種入細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞貼在蓋玻片上生長良好后,即可進(jìn)行固定等后續(xù)操作。 

  對于懸浮細(xì)胞:把細(xì)胞先在固定液中固定,然后把細(xì)胞滴加在載玻片上,干燥后細(xì)胞會緊貼在載玻片上。然后就可以進(jìn)行后續(xù)操作。如果細(xì)胞的粘附能力不佳,可以在載玻片上用PDL等物質(zhì)進(jìn)行處理,以增強(qiáng)載玻片的粘附能力。  

  對于冷凍切片:切片放置在載玻片上后,可以直接進(jìn)行固定等后續(xù)操作。

  對于石蠟切片:脫蠟:切片在二甲苯中脫蠟5分鐘,再換用新鮮的二甲苯脫蠟,共用二甲苯脫蠟3次。無水乙醇5分鐘,兩次。90%乙醇5分鐘,兩 次,70%乙醇5分鐘,一次。蒸餾水5分鐘,兩次。
  抗原修復(fù):根據(jù)不同的抗原和抗體,可以選擇把切片放置在如下抗原修復(fù)液中,10mM檸檬酸鈉,pH6.0,或1mM EDTA,pH8.0,或10mM Tris, pH10.0,95℃加熱12分鐘,大約在30分鐘內(nèi)緩慢冷卻至室溫。


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